節(jié)能瓷球稀土瓷砂濾料生產(chǎn)廠家污水中新冠病毒檢測(cè)方法評(píng)估

　　節(jié)能瓷球稀土瓷砂濾料生產(chǎn)廠家污水中新冠病毒檢測(cè)方法評(píng)估

　　節(jié)能瓷球稀土瓷砂濾料廠家污水中新冠病毒檢測(cè)方法評(píng)估。

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　　圖文摘要

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　　導(dǎo) 讀

　　新型冠狀病毒 (SARS-CoV-2, 簡(jiǎn)稱(chēng)新冠病毒)爆發(fā)后，檢測(cè)分析污水中的新冠病毒，可為醫(yī)學(xué)測(cè)試提供重要的輔助資料，包括提供疫情預(yù)警信號(hào)、追蹤社區(qū)疫情發(fā)展和發(fā)現(xiàn)社區(qū)隱形個(gè)案等。不同于臨床樣品，污水樣品新冠病毒RNA因受社區(qū)人群影響而被高度稀釋?zhuān)�因此，在檢測(cè)之前需要先進(jìn)行病毒濃縮。

　　本文評(píng)估了十一種不同的方法流程對(duì)污水中新冠病毒檢測(cè)效果的影響，包括八種小體積方法的比較，大體積與小體積方法的比較，以及兩種不同提取方法的比較。

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　　八種小體積方法的比較

　　將采集的污水樣品滅活后，加入滅活的SARS-CoV-2病毒用于方法評(píng)估。對(duì)于小體積樣品，評(píng)估了基于四種不同方法原理的八種方法流程。

　　結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超速離心法表現(xiàn)出最高的回收率 (25.4 ± 5.9%)，且顯著高于其他的方法原理 (p < 0.01)，其次為沉淀法和離心超濾法，最后為膜吸附-洗脫法(圖1)。

　　圖1 八種小體積方法的比較。(a)Ct值 (b)回收率UC: 超速離心法( 150,000 × g， 60分鐘);AlCl3: AlCl3 絮凝沉淀法 (1%, 0.3M, v/v);PEG: PEG沉淀法 (10% PEG, w/v, 及2% NaCl, w/v);MgCl2: MgCl2沉淀法 (1%, 2.5M, v/v);A15：離心超濾法 (使用分子當(dāng)量為10 kDa的Amicon-Ultra 15 Centrifugal Filter);C70：離心超濾法 (使用分子當(dāng)量為30 kDa的Centricon Plus-70 Centrifugal Filter);AlM：膜吸附-洗脫法(添加AlCl3后使用0.45 μm 的負(fù)電荷濾膜進(jìn)行吸附-洗脫);MgM：膜吸附-洗脫法(添加MgCl2后使用0.45 μm 的負(fù)電荷濾膜進(jìn)行吸附-洗脫)。

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　　大體積和小體積方法的比較

　　為探討使用更大污水體積(1000 mL)對(duì)提高方法靈敏性的可能，本文將三種大體積方法與最優(yōu)的小體積方法(超速離心法)進(jìn)行了比較。

　　在加標(biāo)SARS-CoV-2的污水樣品中，雖然大體積超速離心法的靈敏性優(yōu)于另外兩種大體積方法(AlCl3沉淀法和膜吸附法)，但也只是達(dá)到與小體積超速離心法相近的靈敏性。在加標(biāo)SARS-CoV-2而處于臨界值濃度的污水樣品中，大體積和小體積方法均能達(dá)到同樣的檢測(cè)范圍。

　　在35個(gè)未加標(biāo)的真實(shí)污水樣品中，大體積和小體積超速離心法表現(xiàn)出一樣的檢出率，大體積方法的Ct值略低于小體積方法 (0.67 Ct)。

　　該結(jié)果表明，增大污水體積并不能顯著提高方法靈敏性，可能是由于污水的基質(zhì)效應(yīng)在大體積方法中被同步濃縮，不利于后續(xù)的RNA提取與檢測(cè)。

　　圖2 大體積和小體積方法的比較。(a)三種大體積方法和最優(yōu)小體積方法的Ct值比較;(b)基于35個(gè)未加標(biāo)的真實(shí)污水樣品的大體積和小體積超速離心法的Ct值比較。

　　Large-UC: 大體積超速離心法 (20,000 × g離心30分鐘，再150,000 × g超速離心60分鐘);AlCl3: AlCl3 絮凝沉淀法 (1%, 0.3M, v/v);Membrane：膜吸附-洗脫法(使用0.45 μm 的負(fù)電荷濾膜進(jìn)行吸附-脫附);Small-UC: 小體積超速離心法 (150,000 × g超速離心60分鐘)。

　　表1 加標(biāo)SARS-CoV-2而處于臨界濃度的污水樣品和未加標(biāo)的真實(shí)污水樣品的檢出率和Ct值

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　　兩種提取方法的比較

　　采用小體積超速離心法對(duì)污水樣品濃縮，通過(guò)比較兩種不同的RNA提取方法。

　　結(jié)果表明，在加標(biāo)SARS-CoV-2到不同基質(zhì)效應(yīng)的污水樣品中，QIAamp Viral RNA Kit(簡(jiǎn)稱(chēng)Viral Kit)比TRIzol Plus RNA Purification Kit(簡(jiǎn)稱(chēng)TRIzol Kit)能夠檢測(cè)到更低Ct值(圖3a);

　　在加標(biāo)SARS-CoV-2而處于臨界值濃度的污水樣品中，Viral Kit檢測(cè)濃度范圍能達(dá)到低濃度樣品，而TRIzol Kit只能達(dá)到中濃度樣品(表1，圖3b)。

　　在PBS(生理鹽水)或污水梯度稀釋的樣品中，Viral Kit比TRIzol Kit表現(xiàn)出更高的提取效率(圖3c 和圖3d)。該結(jié)果表明，Viral Kit表現(xiàn)優(yōu)于TRIzol Kit，但兩者均有較好的提取效果。

　　圖3 兩種提取方法的比較。(a)加標(biāo)SARS-CoV-2到不同基質(zhì)效應(yīng)的污水樣品的Ct值比較;(b)基于31個(gè)未加標(biāo)真實(shí)樣品的Ct值比較;(c)用PBS梯度稀釋加標(biāo)樣品的Ct值比較;(d)用污水梯度稀釋加標(biāo)樣品的Ct值比較。

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　　總 結(jié)

　　本文以加標(biāo)SARS-CoV-2的污水樣品和未加標(biāo)的真實(shí)污水樣品為研究對(duì)象，評(píng)估了十一種不同的新冠病毒檢測(cè)方法，包括不同的方法原理，不同的污水體積和不同的提取方法。

　　總體而言，小體積超速離心法結(jié)合病毒裂解液法的Viral Kit進(jìn)行RNA提取能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)污水中SARS-CoV-2病毒的快速而靈敏檢測(cè)。

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